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4.4.2 Charakterisierung

Proteinidentifizierung und Untersuchung der Cofaktor-Bindung durch

analytische Gelfiltration:

MJMtrA3 wurde bei der analytischen Gelfiltration als basisliniengetrennter Peak

eluiert (siehe Abbildung 4.10). Das Molekulargewicht konnte anhand einer

Eichgerade (siehe Anhang, Abschnitt 7.1) auf ca. 31 kDa geschätzt werden. Die

Absorption bei 365 nm lässt darauf schließen, dass der bei dieser Wellenlänge

absorbierende Cofaktor Vitamin B

12a

an das Enzym gebunden ist. Bei der

Rechromatographie auf Superdex 200 von bereits mit Gelfiltration gereinigtem

Protein trat nur ein schwacher niedermolekularer Peak bei ca. 1 kDa auf, bei dem es

sich um nicht gebundenes Vitamin B

12a

handelt. Es ist also davon auszugehen, dass

der Cofaktor an MJMtrA3 relativ stabil und damit wahrscheinlich spezifisch gebunden

ist.

Superdex 200 MJMtrA3

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,4 0,9 1,4 1,9 2,4

Elutionvolumen/[mL]

Absorption 280 nm/[mAU]

0,00

0,01

0,02

0,03

0,04

0,05

0,06

Absorption 365 nm/[mAU]

280 nm

365 nm

~ 31 kDa

~ 1 kDa

Abbildung 4.10

: Elutionsprofil der Rechromatographie auf Superdex 200 von bereits durch

Gelfiltration gereinigtem MJMtrA3. Das Protein wird als Basislinien getrennter Peak bei ca.

31 kDa eluiert. Der Peak von 1 kDa ist eine kleine Menge des nicht gebundenen Cofaktors

Vitamin B

12a

1 2 ... 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 ... 143 144

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