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MTD 243-670 Manual do Utilizador Página 74

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Ionenaustauschchromatographie mit Q-Sepharose:
Die vereinigten Fraktionen des vorherigen Abschnitts wurden einer weiteren
Chromatographie auf einem starken Anionentauscher (Q-Sepharose HP)
unterzogen. Der Gesamtkomplex (MtrA-H) wurde bei 748-829 mM NaCl (72-81 %
Puffer B.1) eluiert, der Komplex ohne Untereinheit MtrH (MtrA-G) bei 530-590 mM
NaCl (53-59 % Puffer B.2) (siehe Abbildung 4.3).
Nach Analyse der erhaltenen Fraktionen mittels SDS-Page zeigte sich beim
Gesamtkomplex MtrA-H, dass nach diesem Reinigungsschritt wiederum einige
Fraktionen auftraten, die zwar den Komplex jedoch nur geringe Mengen an
Untereinheit MtrH enthielten. Diese wurden verworfen. Diejenigen Fraktionen, welche
MtrA-H enthielten, wurden vereinigt.
Bei der Reinigung von MtrA-G traten dagegen nur Fraktionen mit sehr wenig
MtrH auf und alle den Restkomplex enthaltende Fraktionen konnten
zusammengeführt werden.
Q Sepharose MtrA-H
0
100
200
300
400
500
600
700
170 220 270 320 370
Elutionsvolumen/[mL]
Absorption 280 nm/[mAU]
0
20
40
60
80
100
Puffer B.1/[%]
280 nm
365 nm
Puffer B.1
Q Sepharose MtrA-G
0
100
200
300
400
500
600
700
170 220 270 320 370 420 470
Elutionsvolumen/[mL]
Absorption 280 nm/[mAU]
0
20
40
60
80
100
Puffer B.1/[%]
280 nm
365 nm
Puffer B.2
57
Abbildung 4.3: Elutionsprofile und Coomassie-gefärbte SDS-Pages der zugehörigen
Fraktionen der Ionenaustauschchromatographie auf Q-Sepharose der Mtr-Komplexe mit und
ohne Untereinheit MtrH. Auf Bahn 1 der SDS-Page ist der vollständigen Komplexes MtrA-H,
auf Bahn 2 ist der Komplexes MtrA-G mit sehr geringem Gehalt an Untereinheit MtrH (34 kDa)
nach dem zweiten Reinigungsschritt zu sehen.
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