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5 Diskussion

berechnete Wert auf 27 kDa belief. Gründe hierfür könnten eine erhöhte

elektrophoretische Mobilität des korrekt gefalteten Apoproteins sein, wie sie bereits

für MtrA aus M. marburgensis beschrieben wurde (56, 57, 143). Wahrscheinlicher

jedoch ist eine unvollständige Expression des Gens in E. coli, deren Produkte als

niedermolekulare Banden im SDS-Gel auftraten. Bruchstücke, die den C-Terminus

von MKMtrA enthielten, waren aufgrund des StrepII-Anhängsels im Western Blot

nachweisbar.

Die Bindung von MKMtrA an eine Strep-Tactin

-Säule gelang zwar teilweise,

jedoch war eine Reinigung auf diese Weise nicht möglich, da die Bindung nur

unvollständig geschah. Dies könnte dadurch begründet sein, dass der C-Terminus

mit dem StrepII-Anhängsel im gefalteten Zustand nicht richtig zugänglich ist und

deswegen nicht an Strep-Tactin

gebunden werden kann.

Eine MALDI-TOF-Fingerprint-Analyse nach einem Trypsin-Verdau der im

Western Blot sichtbaren Bande sollte Klarheit über das exprimierte Produkt bringen.

MtrA aus M. kandleri konnte mit dieser Methode jedoch nicht eindeutig

nachgewiesen werden. Ein neuerlicher Versuch mittels ESI-MS könnte eventuell

Aufschluss bringen. Aufgrund der bereits auf der Expressionsebene aufgetretenen

Schwierigkeiten wurden die Versuche mit MKMtrA a/jointfilesconvert/483107/bgebrochen.

5.3 Die Untereinheit MtrH des N

-Methyl-H

MPT:CoM-Methyltransferase-

komplexes

5.3.1 Heterologe Expression

MtrH enthält nur 38,1 % hydrophobe Aminosäurereste und besitzt laut

Sekundärstrukturanalyse keine Transmembranhelices, womit es die hydrophilste

Untereinheit des Methyltransferasekomplexes darstellt (54). Dennoch wurde sowohl

MtrH aus M. marburgensis, als auch aus M. jannaschii und M. kandleri unabhängig

von den Wachstumsbedingungen oder dem Induktionssystem unlöslich in

Einschlusskörperchen exprimiert. Auch eine in Analogie zur ebenfalls Pterin-

bindenden 5-Methyltetrahydrofolat Corrinoid/Eisen-Schwefel-Protein Methyl-

transferase aus Moorella thermoacetica vorgenommenen Verkürzung um elf

N-terminale Aminosäuren bei M. kandleri MtrH ermöglichte keine lösliche Expression

in E. coli.

Wie sich herausstellte, wurde die Annotation der in dieser Arbeit zur Klonierung

von mtrH aus M. jannaschii verwendeten Sequenz im März 2007 in der Datenbank

(GenBank Nr. NC_000909, (6)) korrigiert. Das in dieser Arbeit heterolog exprimierte

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