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INHALTSVERZEICHNIS

Inhaltsverzeichnis

1 Einleitung....................................................................................................................... 1

2 Material und Methoden.................................................................................................. 5

2.1 Organismen und Plasmide .................................................................................. 5

2.2 Nährmedien und Puffer....................................................................................... 6

2.2.1 Medien für Escherichia coli ........................................................................ 6

2.2.2 Medienzusätze ............................................................................................. 6

2.2.3 Stamm- und Pufferlösungen ........................................................................ 7

2.3 Zellanzucht und Stammhaltung .......................................................................... 7

2.3.1 Zellanzucht................................................................................................... 7

2.3.1.1 Anzucht von Ralstonia eutropha H16 .................................................. 7

2.3.1.2 Anzucht von Methanospaera stadtmanae ............................................ 8

2.3.1.3 Anzucht von Escherichia coli............................................................... 8

2.3.2 Stammhaltung .............................................................................................. 9

2.4 Standardtechniken für die Arbeit mit Nukleinsäuren ......................................... 9

2.4.1 Geräte und Lösungen................................................................................... 9

2.4.2 Dialyse von Nukleinsäuren.......................................................................... 9

2.4.3 DNA-Konzentrationsbestimmung und Reinheitskontrolle........................ 10

2.4.4 Agarose-Gelelektrophorese ....................................................................... 10

2.4.5 Saccharose-Dichtegradientenzentrifugation .............................................. 11

2.4.6 Isolierung chromosomaler DNA................................................................ 12

2.4.7 Isolierung von Plasmid DNA..................................................................... 13

2.4.8 Aufreinigung von DNA-Fragmenten......................................................... 13

2.4.9 Isolation von DNA-Fragmenten aus Agarosegelen................................... 14

2.4.10 Scheren von DNA.................................................................................... 14

2.5 Modifikation von Nukleinsäuren...................................................................... 15

2.5.1 Restriktion.................................................................................................. 15

2.5.2 Dephosphorylierung................................................................................... 15

2.5.3 Herstellung glatter DNA-Enden (blunt ends) ............................................ 16

2.5.4 Herstellung von Insert-DNA mit A-Überhang .......................................... 16

2.5.5 Ligation...................................................................................................... 17

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